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选购QS5定量PCR仪前,这两个误区一定要先了解!

更新时间:2022-12-30      点击次数:459
  面对各种不同性能的QS5定量PCR仪,咱们该如何选择呢?建议大家首先要走出认识QS5定量PCR仪的两个误区:
 
  误区一:QS5定量PCR仪无需梯度功能
  对于使用染料法的定量PCR反应,虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度(Tm值),但运用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差异会很大。引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化,对于特殊片断,经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果,退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响,因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在规定范围内按照梯度变化,根据结果,一步就可以摸索出适合的反应条件。
  不单退火温度,连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增的多数高保真Taq酶来说这个非常重要,因为Taq和校正酶的最佳反应温度可能有显著差异,优化延伸温度就显得很重要。
  使用有梯度功能的QS5定量PCR仪可以一次完成以往多次实验才能完成的优化过程,简化了摸索PCR反应条件的繁琐实验,既节省实验时间提高效率,又节省实验成本。
 
  误区二:仪器通道越多越好
  随着PCR技术的成熟运用,多重扩增越来越热闹,QS5定量PCR仪也不能幸免。从最初单通道发展到如今的4通道、5通道甚至6通道,眼花缭乱的选择让人无所适从,就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。
  在使用有些厂家5通道的荧光定量仪时,为了确保实验结果的精确性和准确性都要在实验中使用ROX(一种荧光染料)或专用的Reference dye ,这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。这样一来,真正能检测多重PCR信号的有效通道只有4个,而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。有的QS5定量PCR仪检测通道只为自已厂家专用的荧光染料或试剂开放的,有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。在购买前确认QS5定量PCR仪的有效检测通道尤为重要,考虑多重通道数的时候也应该从实验室实际情况出发,不能单单只听宣传。

 

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